免疫學三大工具，IHC、Westernblot、ELISA，分別用于定位，定性和定量!IHC（免疫組化）是融合了免疫學原理（抗原抗體特異性結(jié)合）和組織學技術(shù)（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色，來對組織（細胞）內(nèi)抗原進行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細胞或組織，要在顯微鏡下觀察結(jié)果，可能出現(xiàn)膜陽性、質(zhì)陽性和核陽性。ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）用到了免疫學原理和化學反應顯色，待測的樣品...

使用牛垂體提取物工作人員應當首先注意自身安全,必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗.對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當?shù)燃壍臒o菌操作臺進行（至少是ClassII）操作過程中,應避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。定期檢測下列項目，CO2鋼瓶的CO2壓力，CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和...

血清小知識血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，而且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞的起到某些保護作用。胎牛血清應取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出...

Q：步驟上的可選步驟能否省略？A：該試劑盒是經(jīng)過實驗驗證的，再進行驗證實驗的時候?qū)嶒炇叶际且鲞@個可選步驟的，建議不要省略，按照說明書操作。Q：proteinA和proteinGbeads怎么選？A：各5ul就可以了Q：超聲破碎冰上操作是必須的嗎？4℃條件能否微調(diào)？A：建議冰上操作，4℃是可以微調(diào)的。Q：beads出現(xiàn)吸不出來的情況，怎么處理？A：吸之前需注意槍頭要剪一下再吸，如若beads吸不上來，可加入等體積的20%乙醇混勻后再吸。Q：如果沒有超聲破碎儀的話，能不能用酶解...

1、血清封閉：組織切片上有剩余的位點可以與一抗非特異性結(jié)合，造成后續(xù)結(jié)果的假陽性；因此需要使用封閉劑進行封閉。常用試劑為血清和BSA等。封閉血清一般是和二抗同一來源的，但不能與一抗來源一致。2、一抗和二抗?jié)舛群头跤龝r間：一抗孵育條件在免疫組化反應中zui重要，包括孵育時間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果*；孵育時間與溫度、抗體濃度有關(guān)，一般37度1-2h，4度過夜（從冰箱拿出后37度復溫45min）。具體條件還要摸索。二抗一般室溫或37度30m...

標簽抗體，別名為抗原表位，又稱抗原決定簇，是抗原分子中決定抗原特異性的特殊區(qū)域或基團，是與抗體特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)或序列。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，科研人員可以通過DNA重組技術(shù)，構(gòu)建包含目的基因以及表位標記的融合蛋白，進而通過特異性標簽抗體對其鑒定與純化，以達到研究的需求。常用的標簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。1.Flag標簽—抗Flag標簽抗體Flag標簽系統(tǒng)是利用一個短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標蛋白。Flag標簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該...

1、標本固定：固定的目的是：①，防止標本從玻片上脫落；②，除去防礙抗原—抗體結(jié)合的類脂，使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果；③，固定的標本易于保存。固定劑的選擇一般用4%多聚甲醛。2、脫水、石蠟包埋和制片：脫水用梯度乙醇（由低到高）充分脫水、對組織要*浸蠟、切片時刀片要干凈和鋒利。否則容易裂片和脫片等。3、脫蠟和水化：這是為了后面的抗體等試劑能夠充分與組織中抗原等結(jié)合反應。脫蠟可以先60度20min，然后立即二甲苯1-3分別10min，但當天制好的切片可以60度3-4h。...

Q:什么是霍亂毒素？A:霍亂毒素由（Choleratoxin,CT）兩個亞單位組成，即A亞單位（CTA）和B亞單位（CTB）。A亞單位是霍亂毒素的活性部分，B亞單位的主要功能是通過與哺乳動物小腸上皮細胞上的單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂GM1結(jié)合而使得A亞單位進入細胞。Q:霍亂毒素是如何反激活的？A:霍亂毒素由霍亂操縱子（ctx）編碼，從5'到3'方向，依次是反激活因子ToxR的識別序列、啟動子、A基因（ctxA）、B基因（ctxB）和不依賴于r因子的轉(zhuǎn)錄終止系列。現(xiàn)在普遍認為操縱子中只...