IHC、ELISA和WB區別

是融合了免疫學原理（抗原抗體特異性結合）和組織學技術（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色，來對組織（細胞）內抗原進行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細胞或組織，要在顯微鏡下觀察結果，可能出現膜陽性、質陽性和核陽性。

 

用到了免疫學原理和化學反應顯色，待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細胞或組織培養上清液，因而沒有用到組織包埋、切片等技術，這是與免疫組化的主要區別，操作上開始需要將抗原或抗體結合到固相載體表面，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。

 

免疫組化和elisa所用到的原理大致相同，只是因為所檢測的樣品不同，從而在操作方法上有所不同。elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高。

 

先要進行SDS-PAGE，然后將分離開的蛋白質樣品用電轉儀轉移到固相載體上，而后利用抗原-抗體-標記物顯色來檢測樣品，可以用于定性和半定量。

 

該方法可在組織和細胞中進行抗原的準確定位, 因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察，這樣就可以進行形態與功能相結合的研究，相比于其他蛋白檢測方法，免疫組化具有定位較直接準確、定性靈敏度高，是定位檢測分析方法對病理學領域開展深入研究是十分有意義，尤其對于有些因子的轉位研究十分有用。

 

當然WB也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量，進而間接反映它們的定位)，但敏感性遠遠低于IHC。

 

尤其對于微定量分析多個樣本非常有用，所用試劑和樣品量很少，結果。IHC針對性比較強，而且一般是以組織或者細胞為樣本，而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液。免疫組化可以快速檢測樣本中抗體的陽性或者陰性，一般不用于定量檢測。

 

     western blotting：可以看到特異性的條帶，但是定量比較煩

 

     ELISA：可以直接讀出濃度，但是如果抗體有非特異性結合，那得到的數值就不可信。

 

     WB：只能半定量,但是可以檢測細胞膜蛋白,這點elisa做不到

 

     ELISA：可用定量方法檢測蛋白,也就是說可以觀察不同濃度刺激物對目的蛋白的影響 

 

     WB：所檢測的一般是抗原，而elisa抗原抗體都可以檢測。

     WB：所檢測的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚體、降解產物等，一句話，WB可以確定所用抗體是與哪種蛋白起作用的；而elisa無能為力，一鍋端了。

 

     WB：所適用的一抗一般是線性位點的，elisa線性或構象型抗體都可以使用。從另一個意義上講，WB可以做抗體是線性位點還是構象型位點的補充判定，而elisa不行。

 

     WB：一次處理量就是一塊膠版，10-20個樣品zui多了。elisa一塊96孔板一次可以處理96個樣本，可以設置多個復孔、對照、梯度樣等來提高檢測的可信度。

     WB：操作常見的非特異性條帶，膜本底差，顯色不好等等缺點在elisa上表現得要好得多。