β-Tubulin即微管蛋白，是細胞的一種骨架蛋白。Tubulin分為α、β、γ、δ、ε等多種tubulin，其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成異源二聚體，是形成微管的zui主要的兩種Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分別為55kDa和50kDa，其實際檢測條帶均在55kDa左右。β-tubulin抗體被廣泛用于WesternBlotting時上樣量是否一致的參照，也常被用于免疫染色觀察細胞的微管結構。β-Tubulin抗體的英文別名...

Marker，染色及內參等相關問題Q：用的是預染marker，但是電泳總跑不全8條帶，請問什么原因？怎樣改善？膠用過8％，10％，12％，都是這樣。marker是新買的。A：一般來說，是小分子量Marker跑走了，可以增加膠濃度或減少電泳時間。梯度膠也是不錯的選擇。（梯度凝膠愛必信就可提供呦）Q：WesternBlot哪種染色好？A：（1）陰離子染料是zui常用的，特別是氨基黑，脫色快，背景低檢測極限可達到1.5μg，考馬雖然與氨基黑有相同的靈敏度，但脫色慢，背景高。麗春紅S...

針對抗體常見問題Q：做細胞信號傳導，要做磷酸化某因子WesternBlot，其二抗有何要求？A：對二抗有無要求，要看你實驗條件來選擇，一般推薦用HRP標記的二抗。Q：免疫組化和WesternBlot可以用同一種抗體嗎？A：免疫組化時抗體識別的是未經變性處理的抗原決定簇（又稱表位），有些表位是線性的，而有的屬于構象型；線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；構象型表位由于受蛋白空間結構限制，煮后變性會消失。如果你所用的抗體識別的是蛋白上連續的幾個氨基酸，也就是線...

針對樣品的常見問題：Q：細胞水平要做WesternBlot，多少細胞提的蛋白夠WesternBlot？A：一般地5*106就足夠了。Q:同一樣品能同時提RNA又提蛋白嗎，這樣對WesternBlot有無影響?A：能，沒有問題的。Q:同一蛋白樣品能同時進行兩種因子的WesternBlot檢測嗎？A：當然可以，有的甚至可以同時測幾十種樣品。Q:如果目標蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白，操作需要注意什么？A:如果是膜蛋白和胞漿蛋白，所用的去垢劑就要溫和得多，這時建議加上NaF去抑制磷酸化酶...

Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。我們將通過以下幾個方面來詳細地介紹一下WesternBlot技術：【原理】與Southern或Northern雜交方法類似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如PVDF膜）上...

預染蛋白marker是WesternBlot實驗中常用的一種試劑，那么預染蛋白marker到底是什么？用的時候又有哪些注意事項呢？預染蛋白marker其實就是一些純化好的蛋白混合物，通過與染料共價耦聯，在電泳過程中或者轉膜時可以直接觀察到。預染蛋白marker的出現方便了我們的實驗，可以幫助我們在電泳時、電泳后，以及轉膜后監測電泳情況和估計遷移率。比如使用垂直電泳時*分辨區域大約在膠的2/3處，我們使用預染Marker就可以預測電泳的進程。當目標蛋白進入*分辨區時就可以停止電...

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Forskolin在不與細胞表面受體相互作用前提下刺激腺苷酸環化酶活性。在脂肪細胞中Forskolin's促進cAMP產生進而可以抑制嗜堿性粒細胞和肥大細胞脫顆粒作用以及組胺釋放，降低血壓、眼內壓，抑制血小板聚集，促進血管舒張，支氣管擴張和甲狀腺激素分泌，刺激脂肪分解。Forskolin抑制血小板活化因子(PAF)的結合,這種抑制不依賴于cAMP形成可能是Forskolin直接作用于PAF或者通過干擾PAF與它的受體結合實現的，似乎對多種膜轉運蛋白也有效果并且可以抑制脂肪細胞...