核酸共轉染試劑

產品介紹：

核酸共轉染試劑盒是我們研發的專門用于將質粒 DNA、siRNA 或 mimics 共同轉染于同一細胞的試劑盒。它具有非常好的轉染性能，可將質粒 DNA 和 siRNA 高效地共轉染于絕大多數貼壁細胞和原代細胞。在貼壁細胞中，質粒 DNA 轉染效率可高達 90%以上，siRNA 在質粒轉染陽性細胞中共轉染效率可高達 95%以上。其功能強大，不僅可高效轉染質粒 DNA 和 siRNA，還可高效轉染 mRNA、mimics、反義核酸和各種小分子 DNA。與目前市場上常見的脂質體轉染試劑不同，我們的共轉染試劑 采用生物可降解材料配制，對細胞的毒性很低，轉染后 24 小時細胞死亡率不到 10%。使用也非常方便，先將轉染試劑與質粒 DNA 和 siRNA 混合，再將該轉染復合物直接加入培養細胞中，血清不影響其轉染效果，不必刻意添加或更換培養液，操作十分簡便。

產品特點：

1、強大的質粒DNA與siRNA共轉染性能，可高效轉染多種貼壁細胞和原代細胞，質粒DNA轉染效率在貼壁細胞中可高達90%以上，siRNA在質粒轉染陽性細胞中共轉染效率高達95%以上；
2、共轉染功能強大，不僅可將質粒DNA與siRNA共轉染于同一細胞，還可共轉染mRNA、mimics、反義核酸于同一細胞；
3、極低的細胞毒性：使用可降解生物材料，細胞毒性低，轉染細胞死亡率不到10%，大大降低了因細胞毒性對實驗結果的影響。

操作步驟（以 24 孔板轉染為例）:

A、 細胞接種:
1、轉染前一天對細胞進行轉接，每孔接種1.5×105個細胞，使轉染時細胞密度為80-90%，且生長良好（非常重要）；
2、 最好在轉染開始之前更換新鮮的含血清培養基，以防轉染后孵育階段細胞密度太大、營養不足導致細胞死亡。

B、試劑A轉染復合物制備（該步完成后應立即進行轉染）：
1、在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養基，再加入適量的轉染試劑，見附表。用移液器輕輕混勻，室溫靜置5分鐘。
2、在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養基，再加入適量的DNA，輕輕混勻，之后再加入適量的siRNA，見附表。用移液器再次輕輕 混勻，室溫靜置5分鐘。
3、將DNA-siRNA-培養基混合物滴加至試劑A-培養基混合物中，用移液器輕輕混勻，室溫靜置15~20分鐘，立即轉染。注意：試劑A-培養基混合物和DNA-siRNA-培養基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉染:
1、將步驟B制備的轉染復合物滴加至培養基中，邊加邊輕輕晃動培養板以使復合物均勻分布。加完后，立即將培養板轉入培養箱繼續培養。
2、 培養24-48小時后觀察或進行下一步實驗。
3、試劑A在培養基中仍有較高的轉染效率，因此轉染前后不需要換成無血清或低血清培養基。

附表 1：不同培養體系推薦初始轉染條件

儲存/保存方法：

-20°C 保存，有效期一年，使用前請輕輕混勻。

注意事項：

1、剛開始轉染，請務必進行優化實驗，如24孔板質粒轉染，每孔質粒用量0.8ug，siRNA用量15pmol，試劑A可選擇2.0ul、2.5ul、3.0ul進行優化。或者，每孔質粒用量0.8ug，試劑A用量2.5ul，siRNA用量選擇10pmol、15pmol、20pmol、25pmol進行優化。
2、在制備DNA-siRNA轉染復合物時，應避免體系中存在血清，因血清會干擾試劑A與DNA、siRNA形成復合物。培養體系中盡量不要添加抗生素，抗生素會導致培養細胞死亡。

**溫馨提示：本產品僅作科研實驗使用，不支持臨床等研究