質粒DNA轉染試劑盒（貼壁細胞）

產品介紹：
這款產品是在DeofectEU Transfection Reagent的基礎上進一步優化研發成功的專門用于質粒DNA細胞轉染的轉染試劑。它具有非常好的轉染性能，可高效轉染多種貼壁細胞、原代細胞和懸浮細胞，轉染效率在貼壁細胞中高達90%以上（EGFP質粒）。與目前市場上常見的脂質體轉染試劑不同，它采用生物可降解材料配制，對細胞的毒性很低，轉染后細胞死亡率不到10%。這款產品使用也非常方便，先將轉染試劑與質粒DNA混合，再將轉染試劑-DNA復合物直接加入培養細胞中，血清不影響其轉染效果，不必刻意添加或更換培養液，操作十分簡便。

產品特點：
1、強大的細胞轉染性能：可高效轉染多種貼壁細胞、原代細胞和懸浮細胞，轉染效率在貼壁細胞中高達90%以上；
2、極低的細胞毒性：使用可降解生物材料，細胞毒性低，轉染細胞死亡率不到10%，大大降低了因細胞毒性對實驗結果的影響，實驗結果更為客觀；
3、操作簡便，可用于含血清培養基培養細胞的轉染，轉染前后不需要更換培養液。

方法步驟（以24孔板轉染為例）:

A、細胞接種:
1、轉染前24小時左右對細胞進行轉接，培養過夜。
2、確保轉染時細胞密度為90%左右。
3、最好在轉染開始之前更換新鮮的含血清培養基，以防轉染后孵育階段細胞密度太大、營養不足導致細胞死亡。

B、R /DNA轉染復合物制備(該步完成后應立即進行轉染):
1、在1.5ml無菌離心管中加入50ul Trans buffer，再加入適量的轉染試劑，見附表。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
2、在1.5ml無菌離心管中加入50ul Trans buffer，再加入適量的DNA，見附表。用移液器再次輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
3、將DNA-Trans buffer混合物滴加至R-Trans buffer混合物中，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后，立即轉染。

注意： R-Trans buffer混合物和DNA-Trans buffer混合物的混合順序非常重要，切勿顛倒。注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉染:
1、將步驟B制備的轉染復合物滴加至培養基中，邊加邊輕輕晃動培養板以使復合物均勻分布。加完后，立即將培養板轉入培養箱繼續培養。
2、培養12小時后即可觀察，最佳觀察或收獲時間為24-48小時。
3、R在培養基中仍有較高的轉染效率，因此轉染前后不需要換成無血清或低血清培養基。如果轉染后需要更換新鮮培養基，請于加入R/DNA復合物12-24小時后進行。

儲存/保存方法：

-20℃避光保存，Trans buffer 可保存于2-8°C，有效期1年，使用前輕輕混勻。

技術指標：

附表：不同培養體系推薦初始轉染條件

產品用途：

適用細胞系：293T，A549，B16F10，HEK 293，HeLa，Hepa 1-6，Hepa 1cLc7，HepG2，BHK-21，BNL.CL2，BRL-3A，C2C12，C6，CHO-K1，Clone 9，COS-1，COS-7，Daoy，DBTRG-05MG，DI-TNC1，DU 145，HLF-a，Huh-7，K562，KB，KLN 205，Lυ2 (LLC1)，NCaP-FGC，MCF-7，MEL，Neuro-2a，NIH3T3，OVCAR3， PC3，PC-12等。

注意事項：

1、轉染前的細胞匯合度以90%左右為宜，轉染時細胞生長狀態應保持良好，不要有支原體污染。

2、剛開始轉染，建議進行優化實驗，如24孔培養板，每孔質粒用量 0.8ug，轉染試劑用量可選擇2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul進行優化。

3、應避免轉染復合物制備體系中存在血清，因血清會干擾R與 DNA形成復合物，培養基中盡量不要使用抗生素。

4、如果需要穩轉，請在轉染24-48小時后加入篩選培養基。

5、本試劑盒主要用于質粒DNA轉染，如需質粒DNA、RNA、siRNA均可轉染的試劑，請選擇核酸轉染試劑盒（#abs60259）。