Human EGF ELISA Kit

檢測原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附檢測技術。特異性抗人EGF抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本和生物素化的檢測抗體，經過孵育，樣本中存在的EGF與固相抗體和檢測抗體結合，形成免疫復合物。洗滌去除未結合的物質后，加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物，避光顯色。加入終止液終止反應，在450 nm波長(參考校正波長540nm或570nm)測定吸光度值。

檢測類型：雙抗夾心法

形式：預包被96孔板

檢測樣本類型：細胞上清液，血清，血漿

上樣量：100ul

試劑盒組分：

預包被96孔板、標準品、EGF檢測抗體、稀釋用緩沖液、顯色液（A、B）、洗滌液、終止液、SA-HRP、封板膜和說明書一份。

靈敏度：0.089-0.740pg/mL

檢測范圍：3.9 - 250 pg/mL

回收率范圍：96-103%

保存方法：2-8℃

標準曲線圖

背景：

EGF（表皮生長因子，又稱Urogastrone）前體是生長因子EGF家族的Group I成員，分子量為185kDa。Group I成員是結合并活化表皮生長因子受體（EGF R）的分子。EGF家族成員被合成為I型跨膜（TM）蛋白，且由蛋白水解生成可溶形式。人表皮生長因子（EGF）是一個長為1185個氨基酸前體分子形式的一個片段，包含1010個氨基酸細胞外區域、21個氨基酸TM區域和153個氨基酸胞質域。這個前體的胞外域（ECD）有三個主要的結構模塊。其中包括9個BLDLR重復、1個血管性血友病因子A區域和9個類EGF重復，并在近膜區包含了成熟EGF分子的53個氨基酸的結構（為前體形式的第971位至1023位氨基酸）。這個跨膜185kDa的亞型（氨基酸21-1023），存在于大多數體液中。這個過程同時產生了大量40-100kDa的蛋白片段，可能為蛋白水解降解產物。6kDa成熟EGF亞型的產生過程尚不清楚。它可能源自細胞內部，也可能源于細胞表面，通過細胞表面的膜結合絲氨酸酶水解可溶性的160kDa前體或這個前體水解以后生產的70kDa的分子亞型而來。

值得注意的是，成熟形式的EGF、185kDa跨膜蛋白、已被水解但尚未加工的循環型分子和160kDa前體分子都具有生物學活性。而這些生物學活性主要是因為有EGF肽段嵌入在這些前體分子中。其它類型EGF的修飾都不具備結合EGF受體的活性。編碼EGF的基因在表達EGF蛋白過程中存在4種可能的剪切體，但都不影響成熟EGF的序列。其中兩種剪切體發生在胞外區序列，分別刪除了第913位至953位的氨基酸和第314至355位的氨基酸。另外兩種剪切體則涉及EGF的胞內區域，分別以12個氨基酸替換了第1125位至1207位的氨基酸和以17個氨基酸替換了第1136-1207位的氨基酸。成熟的人EGF與小鼠、大鼠和豬的EGF的同源性分別是70%、70%和85%。已知表達EGF 的細胞包括血小板、大腦神經元、星狀膠質細胞和小腦浦肯野細胞、布魯納細胞（十二指腸）和頜下腺細胞、不著色的纖毛上皮和垂體前葉細胞。EGF有許多不同的生理作用。目前廣泛認可的EGF功能主要基于EGF受體-配體的結合而實現。而EGF受體也能和其它EGF家族的蛋白結合，進而形成異源多聚體并與其它EGF受體家族成員二聚化，或者和其它跨膜蛋白如PDGF R?和HGF受體產生關聯。在任何一種情況下，EGF都可以對胎兒和成人組織產生作用。在胎兒，EGF影響雙陰性-雙陽性階段的胸腺細胞生長和分化。在神經元形成過程中，EGF似乎也可以刺激神經膠質神經元的生成并促進其上皮化。后，它能抑制脂肪細胞的成熟，從而增加前脂肪細胞數量。在成人，EGF可以在乳腺的乳生成過程中發揮作用，也可使纖維細胞有絲分裂，ECM離解和遷移，廣泛地影響生長因子相關的各種作用。

EGF受體即表皮生長因子受體（也稱為HER1和ErbB1），其激活機制尚不明確。目前的研究認為每一個EGF分子和一個EGF受體分子有兩個結合位點，這會迫使受體產生構象變化，而和第二個EGF-EGF R復合物結合。這種二聚體即具有實際功能的EGF受體。ErbB2也可以和EGF受體形成異源二聚體，但不能和EGF結合。這可能是因為ErbB2 天然以二聚體的形式存在，掩蓋了其配體結合的位點，而使配體無法與其結合。因此，它需要結合一個已經激活的EGF-EGF R復合體才能形成一個功能性的EGF受體。而由于內在的靜電斥力作用，ErbB2自身無法形成同源二聚體。EGF也只有在高濃度的環境下也能和ErbB3：ErbB2形成異源多聚體。這個過程的重要性，目前仍是未知的。EGF R的選擇性剪切亞型存在于腫瘤細胞中，并可能參與腫瘤發生或使細胞對EGF 受體抑制劑敏感。