一文了解TR-FRET技術

什么是TR-FRET？

TR-FRET（Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer，時間分辨熒光共振能量轉移）是一種用于研究分子間相互作用的生物物理技術。它結合了兩種技術：熒光共振能量轉移(FRET)和時間分辨熒光(TRF，Time-Resolved Fluorescence)。

熒光共振能量轉移原理圖

熒光共振能量轉移(FRET)是一種物理現象，其中一個熒光分子（供體）在吸收光能后，可以將激發能量非放射性地傳遞給另一個分子（受體），如果受體在空間上足夠接近供體（通常在1-10納米范圍內）。這種能量轉移的效率與供體和受體之間的距離的六次方成反比，因此可以用來研究分子間的接近程度和相互作用。

時間分辨熒光原理圖

時間分辨熒光(TRF)是一種測量熒光壽命的技術，它通過在停止激發光源后測量熒光衰減來區分短壽命的背景熒光和長壽命的信號熒光。這允許在激發后的一個特定時間窗口內測量熒光，從而減少背景干擾，提高信號的信噪比。

在TR-FRET中，通常使用長壽命的供體熒光團，如鑭系元素（如銪或鋱）的螯合物，這些供體的熒光壽命較長，可以在激發后的一個延遲時間內被檢測，此時短壽命的背景熒光已經衰減。受體熒光團通常是有機染料或另一種金屬螯合物，其發射波長與供體的發射波長不同。

TR-FRET能做什么？

受體結合研究：

例如，研究者可能對一種新藥如何與心臟藥物靶標β-腎上腺素受體結合感興趣。可以將β-腎上腺素受體標記上銪(Eu)作為供體，將藥物分子標記上一個合適的受體熒光團。

當藥物與受體結合時，觀察到的FRET信號增加，從而可以定量分析藥物的結合親和力。

酶活性檢測：

假設要研究一種新型抑制劑對酪氨酸激酶活性的影響。可以將激酶的底物標記上供體熒光團，并將激酶標記上受體熒光團。在沒有抑制劑的情況下，激酶會磷酸化底物，導致兩者分離，FRET信號減少。添加抑制劑后，如果FRET信號保持高水平，表明抑制劑阻止了激酶的活性。

蛋白質-蛋白質相互作用：

研究腫瘤抑制蛋白p53與MDM2之間的相互作用。將p53標記上供體熒光團，將MDM2標記上受體熒光團。當p53與MDM2相互作用時，FRET信號增加，可以用來研究這種相互作用的動力學和調控機制。

藥物篩選：

在藥物開發過程中，TR-FRET可以用來高通量篩選化合物庫，以找到與特定靶標結合的潛在藥物候選物。

例如，通過將G蛋白偶聯受體(GPCR)標記上供體和受體熒光團，可以篩選能夠激活或抑制該受體的化合物。

與ELISA相比，TR-FRET有什么優缺點？

abs7311微孔板(384孔板,白色,淺孔)

與ELISA相比，TR-FRET具有以下優點：

高靈敏度：TR-FRET技術利用長壽命的熒光標記（如鑭系元素），可以在較長時間內檢測到信號，從而提高檢測的靈敏度；

高穩定性：由于使用了時間分辨檢測，可以減少背景噪聲，提高信號的穩定性；

無需洗滌步驟：TR-FRET實驗通常是均相的，不需要洗滌步驟，簡化了操作流程；

節省樣本：TR-FRET搭配96孔板（abs7308微孔板（96孔板，白色，淺孔）或384孔板（abs7311微孔板（384孔板，白色，淺孔），384孔板一般每孔僅需要10uL樣本；

線性范圍廣：可以同時檢測高濃度和低濃度的樣品；

快速：TR-FRET實驗通常可以在1h內完成，包括信號的產生和檢測。

但是由于TR-FRET實驗需要特殊的熒光標記和時間分辨熒光讀板機(TRF Reader)，這可能比傳統的ELISA成本更高。技術層面，TR-FRET技術可能需要更多的技術知識和專業設備來進行實驗和數據分析。

absin能為客戶提供的TR-FRET產品有哪些？

除以上提到的96孔和384孔微孔板以外，absin還可以提供Human KRAS & cRAF系列、Human IgG系列、DDB1-CRBN&GSPT1系列的檢測試劑盒。

1、Human KRAS & cRAF系列

1）省力：無需洗滌；

2）省時：僅需1h孵育；

3）省樣本：20uL/孔或更低反應體系；

4）高通量：96/384/1536微孔板均可搭配。

數據實例（以abs560004 Human KRAS G12C&cRAF Binding Kit為例）：

以下數據不能代替實驗中獲得的數據，只作為示例，結果可能因TR-FRET兼容儀器而異。

2、Human IgG 系列

abs560002 Human Total IgG Kit(Assay Pro) 競爭法

abs560011 Human IgG Sandwich Assay Kit 夾心法

數據實例

以下數據不能代替實驗中獲得的數據，只作為示例，結果可能因TR-FRET兼容儀器而異。

? abs560002 Human Total IgG Kit(Assay Pro) 競爭法

? abs560011 Human IgG Sandwich Assay Kit 夾心法

3、Human DDB1-CRBN&GSPT1系列

用于測定分子膠CC-885及待檢測化合物介導的DDB1/CRBN復合體與GSPT1相互作用。是實現簡單快速的檢測能夠介導DDB1/CRBN復合體與GSPT1相互作用的小分子的高通量方法。

數據示例

以下數據不能代替實驗中獲得的數據，只作為示例，結果可能因TR-FRET兼容儀器而異。

Absin產品線：

爆款產品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(類器官試劑盒+基質膠，胎牛血清+培養添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

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