多重熒光免疫組化Q&A（第四彈）

簡介

多重熒光免疫組化技術（簡稱多色）基于酪氨酸信號放大 (Tyramide dignal amplification，TSA) 技術，是一類利用辣根過氧化酶 (HRP) 對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記的酶學檢測方法。

帶有染料標記的底物酪胺分子在過氧化氫氧化環境下，被抗體或探針固定的HRP轉化為具有短暫活性的中間狀態，然后被激活的中間態分子迅速與相接蛋白分子的富含電子區域（酪氨酸殘基）進行穩定的共價結合。

圖1 酪胺Tyramide的過氧化物酶反應

為什么選擇多色？多色技術的優點

1、同時標記多種蛋白（最多9標10色）；

2、一抗來源不再受限（同種屬多標）；

3、連接辣根過氧化物酶的同種屬二抗；

4、強熒光防淬滅。

本期主要講解客戶對說明書的一些疑惑，說明書常見問題一網打盡！！！

圖2 愛必信多色試劑盒

重要提示！！！

新的一年愛必信部分多色試劑盒染料和抗體更新，例如舊版本TSA520外觀是白色透明，新版本是黃色，老用戶不要誤會染料質量問題！

版本更新之后，新舊試劑盒請不要摻雜，試劑盒需配套使用！

圖3 新版染料TSA520

愛必信多色試劑盒說明書問題解析

1、脫蠟水合步驟中“10%中性福爾馬林浸片10min，滅菌水洗片1min，重復3次"目的是什么？我們以前做石蠟切片的時候沒有這一步。

答：這是后固定的步驟，固定充分的組織可以省略此步。

2、微波修復抗原每一輪染色都要做嗎？可以用抗體洗脫液替代嗎？抗體洗脫液用在哪個步驟？

答：染第一個抗體之前做抗原修復，是為了使被石蠟或者固定劑封閉的抗原決定簇重新暴露出來，使得抗體能夠識別到抗原；在染后面每一個抗體之前的抗原修復，目的是為了去除掉上一輪染色的抗體和殘留沒有結合上的染料，其實更準確的叫法是“抗體洗脫"，也就是說第一次的抗原修復是真正的抗原修復，后面的抗原修復實際上是“抗體洗脫"，“抗體洗脫"可以用抗體洗脫液(abs994)替換，特別是細胞、冰凍切片或者骨樣本，但第一次抗原修復不能被抗體洗脫液替代，冰凍切片可以不進行抗原修復，染色效果欠佳時，可以考慮嘗試進行抗原修復，推薦冰凍切片快速抗原修復液(5×)(abs9207)。

3、需要進行內源性過氧化氫封閉嗎？在哪一步進行？是每輪都要做嗎？

答：需要進行內源性過氧化氫封閉，詳細的步驟是在血清封閉之前，3%的過氧化氫甲醇溶液室溫封閉10-15min，PBST洗三遍，再加血清封閉，過氧化氫封閉做一次就好了。

4、染DAPI之前是否還需要進行抗原修復（指抗體洗脫）？

答：理論上是需要的，但是如果是冰凍切片經過多輪洗脫之后，有很大的脫片風險，這種情況下，寧愿背景不太干凈，也不希望脫片，這一步可以不進行抗原修復。

多色試劑盒買二送一！！！ 活動時間：2024年2月20日-3月31日

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