工具篇 | mRNA標準品應用案例展示

背景介紹：

疫情mRNA疫苗的成功開發使得mRNA技術得到重要的關注。mRNA技術作為一種通用性技術，其研發路徑和生產工藝顯著區別于傳統的生物醫藥研發模式，有望在傳染病疫苗、腫瘤疫苗、免疫治療、蛋白替代療法、治療性抗體等多個領域得到廣泛應用，是醫藥研發進入新紀元。

在對于核酸藥物遞送系統研究、蛋白表達的療效研究以及mRNA藥物研發中工具mRNA起到非常重要作用，那么大家知道什么是工具mRNA，它的作用是什么呢？

什么是工具mRNA？

工具mRNA（mRNA標準品）即成品的標準型信使核糖核酸（類似于大家分子實驗中常用的成品質粒）。用戶購買后無需對mRNA標準品進行任何處理，可直接應用于相應實驗。

愛必信擁有一系列的線性、環狀工具mRNA。其中線性mRNA采用化化學合成的Cap1帽結構，使線性mRNA具有高比例的天然帽子結構，修飾堿基 (N1-Methylpseudo-UTP、Pseudo-UTP、5-Methoxy-UTP、5-Methyl-CTP、N6-Methyl-ATP) 有5種可供選擇，同時使用優化了適用于哺乳動物細胞的密碼子、UTR、polyA結構。環狀mRNA通過體外轉錄生成并環化，繼而分離純化得到成品。

工具mRNA分類：

1、報告基因類

報告基因類mRNA常用于細胞轉染、翻譯效率、藥物遞送、體內成像等研究。其中愛必信EGFP mRNA是一種常用的示蹤蛋白mRNA，熒光穩定性強，用于表達加強的綠色熒光蛋白（分離自水母），發射波長為509nm，可通過熒光顯微鏡或者流式細胞術檢測，是觀察mRNA遞送、翻譯的理想工具。

圖 EGFP mRNA Agarose電泳條帶

圖 HEK293細胞轉染EGFP mRNA 24h后表達效果

愛必信還擁有其他報告基因類工具mRNA如tdTomato mRNA、YFP mRNA、mBanana mRNA等熒光蛋白mRNA，可用于對照驗證實驗，大家如有需要歡迎來詢。

2、基因編輯類

CRISPR/Cas9是*基因編輯系統，被廣泛用于治療各類疾病。Cas9 mRNA可在細胞內瞬時表達Cas9蛋白，能減少免疫反應和脫靶風險。

3、免疫抗原類

免疫抗原類mRNA是腫瘤免疫療法的理想研究工具。卵白蛋白 (OVA) 是絲狀蛋白超家族的一員，是在蛋清中發現的主要糖蛋白。是一種常用的免疫和生化研究抗原，是一種已建立的氣道高反應性模型過敏原，可激活細胞免疫和體液免疫。

4、蛋白替代類

EPO mRNA用于表達人源EPO蛋白 (human erythropoietin) 。我們使用 (Abs CapTM) 在體外轉錄生產了EPO mRNA，化學合成的Cap1結構使其具有高比例的天然的mRNA帽子結構，從而獲得高效的表達效果。

工具mRNA產品特征：

工具mRNA產品優勢：

1、Cap1型帽結構，提高mRNA穩定性及翻譯效率，更適合哺乳動物；
2、5種修飾可供選擇，加入修飾堿基可提高翻譯效率，降低免疫原性；
3、合適的PolyA尾結構，保證mRNA穩定性和翻譯效率；
4、完整性高，質控嚴格，方便研究和應用。

用戶實驗案例1：

用核酸轉染試劑盒(abs60259)轉染mCherry mRNA至HEK293細胞24h、48h，在熒光顯微鏡下觀察到的紅色熒光穩定且信號強。（具體實驗操作可參考核酸轉染試劑盒(abs60259)實驗操作步驟）

圖 轉染mCherry mRNA 24h后的熒光

圖 轉染mCherry mRNA 48h后的熒光

用戶實驗案例2

用mRNA轉染試劑(abs60339)在不同類型細胞中轉染線性工具mRNA—EGFP mRNA，處理細胞24h后利用熒光顯微鏡拍照，各種細胞都呈現較強的綠色熒光。

圖 轉染EGFP mRNA于不同類型細胞中

用戶實驗案例3

注射線性Luciferase mRNA至活體小鼠體內，小鼠體重150ug，每針注射20uL，共計3針，3天后進行活體成像。

圖 Luciferase mRNA注射小鼠后活體成像

FAQ：

1、工具mRNA保存條件是什么？

A：需要低于-40°C保存，-80℃冰箱或液氮保存都可以，愛必信所提供的均為新鮮生產的產品，為了達到最佳使用效果，請在收到貨物的2個月內使用。若不小心將mRNA短期（例如1天）存放于-20℃，可以在正式實驗之前將mRNA跑瓊脂糖凝膠電泳看其是否降解。

2、工具mRNA是什么狀態？

A：我司的工具mRNA是液體狀態，通用溶劑一般是1mM檸檬酸鈉鹽溶液，pH為6.4。

3、工具mRNA的貨期有多久？

A：我公司工具mRNA均為新鮮生產產品，我們收到訂單后會立即安排生產、發貨。一般貨期為1-2周。

4、工具mRNA的純度能達到多少？

A：線性mRNA可達到90%的純度；環狀mRNA如果長度是3-5k，可達到科研級別純度，通常能達到85%的純度。環狀mRNA序列越長，關環效率越低，純化難度越高。

5、工具mRNA推薦的帽結構是哪一種？

A：Cap1 AG。加帽率高達95%。

6、我所需要的工具mRNA在沒有找到，怎么辦？

A：目前市面上常規的mRNA標注品類目我公司都是有的。若我司的工具mRNA類別中沒有您所需的mRNA，您可以選擇我公司的定制合成服務，我們為您設計合成特定的mRNA。

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