呼吸爆發(fā)檢測試劑盒的原理及操作方法

　　呼吸爆發(fā)（respiratory burst）是指在激活的髓系細胞，如中性粒細胞、單核細胞和巨噬細胞等，受到刺激后大量釋放以氧化細胞代謝產生過程中的超氧陰離子等活性物質，從而維護機體抵御外界侵略因素的能力。而呼吸爆發(fā)檢測則是評估和監(jiān)測機體免疫、炎癥和感染狀態(tài)的一種方法。現(xiàn)代科技的發(fā)展使得呼吸爆發(fā)檢測可以通過檢測試劑盒快速、準確地完成。

　　呼吸爆發(fā)檢測試劑盒廣泛應用于臨床、研究和實驗室等領域，用于以下方面的檢測：

　　1.免疫缺陷病變的早期發(fā)現(xiàn)

　　2.炎癥反應的評估

　　3.感染狀態(tài)的檢測

　　4.尋找急性肥厚性髓樣細胞白血病等疾病的鑒別診斷

　　5.研究呼吸爆發(fā)與細胞免疫關系的科學問題

　　目前常用的呼吸爆發(fā)檢測試劑盒是基于激活后的髓系細胞釋放產物的顏色變化或熒光變化來測量呼吸爆發(fā)的活躍程度。其原理可以分為兩種：比色法和熒光法。

　　比色法原理：在具有呼吸爆發(fā)能力的髓系細胞受到適當激動劑的刺激后，需要內源性的NADPH氧化酶（NOX）介導合成超氧陰離子（O2-）。比色法檢測過程中，NOX會將非熒光底物OXID（2,3,5-三苯基四氮梯）還原成熒光有機化合物REDF（2,7-二叔丁基-4,5-二苯基-1,2,4-三唑-3-硫醇）。產生的熒光可被熒光儀測量，其強度與NOX活性相關。

　　熒光法原理：熒光法同樣是基于NOX產生的超氧陰離子，但是其鑒定物質不同，常用的鑒定熒光物質是二苯基巨環(huán)（dihydropyridine，DHR）。熒光素自身不惰性，在被刺激后會被轉化為惰性化合物。DHR在被NOX還原后，會變?yōu)楦邿晒獾难趸铮╫xiDHR），其強度也會被熒光儀檢測到。

　　呼吸爆發(fā)檢測試劑盒的操作方法

　　雖然有些不同種類的呼吸爆發(fā)檢測試劑盒在操作過程中有不同的步驟和條件，但大致操作流程可歸納為以下幾個步驟：

　　1.收集患者或實驗室動物的血樣。血樣需要防止血凝塊形成，如使用抗凝管或具有抗凝劑的收集器。

　　2.加入合適劑量的呼吸爆發(fā)刺激劑。刺激劑被認為對不同細胞類型的激發(fā)程度不同，需要根據檢測對象選擇刺激劑。

　　3.加入比色劑或熒光劑，隨后等待適當時間，直至出現(xiàn)熒光變化或顏色變化。

　　4.使用相應的電子設備（比如熒光測量儀）讀取數據，據此評估呼吸爆發(fā)的程度和活躍性。