SP懸浮細胞質粒DNA轉染試劑盒

產品簡介: 

該產品是我們研發團隊在貼壁細胞質粒DNA轉染試劑的基礎上進一步優化研發成功的專門用于懸浮細胞質粒DNA轉染的試劑。它具有非常好的轉染性能，可高效轉染多種懸浮細胞，轉染效率在懸浮細胞中可高達85%以上（巨噬細胞、EGFP質粒）。與目前市場上常見的脂質體轉染試劑不同，它采用生物可降解材料配制，對細胞的毒性很低，轉染后細胞死亡率不到10%。其使用也非常方便，先將轉染試劑與質粒DNA混合，再將轉染試劑-DNA復合物直接加入培養細胞中，血清不影響其轉染效果，不必刻意添加或更換培養液，操作十分簡便。

產品特點：

1、較好的細胞轉染性能：可高效轉染多種懸浮細胞，轉染效率可高達85%以上；

2、極低的細胞毒性：使用可降解生物材料，細胞毒性低，轉染細胞死亡率不到10%，大大降低了因細胞毒性對實驗結果的影響，實驗結果更為客觀；

3、操作簡便，可用于含血清培養基培養細胞的轉染，轉染前后不需要更換培養液。

應用：

適用細胞系：293F，THP-1、RAW264.7、BMDM、CHO-S、Jurkat， K562、U937，NB4、MSCs等。

操作步驟 （以24 孔板轉染為例）:

A、 細胞接種:

1、 轉染前一天或者兩天接種細胞，接種細胞量為2-4×105 個。

2、 確保轉染時細胞比活度為90%以上，且生長狀態良好。

3、 如果細胞在轉染前一天鋪板，轉染時可以不用換液，如果細胞在轉染前兩天鋪板，轉染時最好換液。

B、 SP/DNA轉染復合物制備(該步完成后應立即進行轉染):

1、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul Trans buffer，再加入適量的DNA，見附表。用移液器輕輕混勻成DNA稀釋液。

2、使用前用移液器吹打混勻轉染試劑，立即往DNA稀釋液中加入適量的轉染試劑，用移液器輕輕混勻。

3、 將SP/DNA復合物室溫靜置15分鐘后，立即轉染。
注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉染:

1、將擬轉染細胞強烈振蕩20-40秒，確保培養細胞分散成單細胞懸液，無細胞結團；

2、將步驟B制備的轉染復合物滴加至培養基中，邊加邊輕輕晃動培養板。加完后，立即將培養板轉入培養箱繼續培養。

3、 培養24-96小時后收獲。

4、 SP在培養基中仍有較高的轉染效率，因此轉染前后不需要換成無血清或低血清培養基。因收獲蛋白需要，可以使用懸浮細胞培養專用的無血清培養基。

附表：不同培養體系推薦初始轉染條件

保存方法：

2-8℃避光保存，Trans buffer可保存于2-8℃有效期一年，使用前請先將本品輕輕混勻。

注意事項：

、1、對于24孔板，轉染前接種細胞量以（2-4）x105細胞為宜，轉染時細胞生長狀態應保持良好，不要有支原體污染。

2、剛開始轉染，建議進行優化實驗，如24孔板，可將細胞接種3個孔，每孔接種細胞數分別為2x105 、 3x105 、4x105，次日質粒轉染，轉染24小時后觀察轉染效果，選擇轉染陽性率較高的細胞接種數進行后續實驗。
3、應避免轉染復合物制備體系中存在血清，因血清會干擾 SP 與DNA形成復合物，轉染所用培養基中盡量不要使用抗生素。
4、為了提高轉染效率，轉染后培養板可放于微型振蕩器上培養或每隔1小時人工振蕩1次（非常重要）。
5、懸浮細胞轉染難度大，且受細胞種類、細胞密度、細胞生長情況、培養方法、操作手法等因素的影響，研究者在轉染之前，應查閱相關文獻，認真準備轉染方案。
6、本試劑主要用于質粒DNA轉染，如需質粒DNA、RNA、siRNA均可轉染的試劑，請選擇SP懸浮細胞核酸轉染試劑（abs60325）。