SDS裂解液

溶液

1、培養(yǎng)的細(xì)胞樣品：
（1）充分融解 SDS 裂解液，之后混勻。取適當(dāng)量的裂解液，使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF（100mM），使其最終濃度為 1mM。
（2）貼壁細(xì)胞：吸除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍（如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可忽略此步）。按照六孔板的每孔細(xì)胞加入 150-250ul 裂解液的比例加量。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-3 秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。如果提取的蛋白樣品用于 ChIP，應(yīng)置于冰上或 4℃裂解 15-30min。
（3）懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指彈散細(xì)胞。按照六孔板的每孔細(xì)胞加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。如果提取的蛋白樣品用于 ChIP，應(yīng)置于冰上或 4℃裂解 15-30min。
（4）充分裂解后，10,000-14,000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、WB 和 ChIP 等操作。
【裂解液用量說(shuō)明】：通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠，如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200uμl 或 250ul。如果用于 ChIP，建議 6 孔板每孔細(xì)胞至少加入 200ul 裂解液。
2、組織樣品：
（1）將組織切成細(xì)小的碎片。
（2）充分融解 SDS 裂解液，之后混勻。取適當(dāng)量的裂解液，使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF（100mM），使其最終濃度為 1mM。
（3）按照每 20mg 組織加入 150-250ul 裂解液的比例加量。
【注意：如果裂解不充分可以適當(dāng)添加用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可適當(dāng)降低用量。】
（4）用玻璃勻漿器勻漿直至充分裂解，此過(guò)程盡量控制在 1-2 分鐘內(nèi)，以減少蛋白的降解。如果提取的蛋白樣品用于 ChIP，應(yīng)置于冰上或 4℃繼續(xù)裂解 10-20min。
（5）充分裂解后，10,000-14,000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、WB 和 ChIP 等實(shí)驗(yàn)。
（6）如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)高強(qiáng)度的漩渦混勻器使樣品裂解充分，之后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解的足夠充分。

1、為取得最佳的使用效果，盡量避免過(guò)多的反復(fù)凍融。可以適當(dāng)分裝后使用。
2、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

-20℃，有效期12個(gè)月。