PI細(xì)胞周期與凋亡試劑盒

本產(chǎn)品用于培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或者懸浮細(xì)胞檢測(cè)，也可用于組織細(xì)胞檢測(cè)。

自備耗材和設(shè)備：
1 ml 移液器
100-200 μl 移液器
旋窩混勻儀
流式細(xì)胞儀
PBS
75%乙醇

適用實(shí)驗(yàn)與操作過(guò)程：
1、細(xì)胞準(zhǔn)備 貼壁細(xì)胞：棄細(xì)胞培養(yǎng)液，胰酶消化，制備單細(xì)胞懸液， 1000 g離心5分鐘，棄上清。沉淀用1 ml預(yù)冷的PBS重懸。再次 1000 g離心5分鐘，棄上清。 懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞懸液，1000 g離心5分鐘，棄上清。沉淀 用1 ml預(yù)冷的PBS重懸。再次1000 g離心5分鐘，棄上清。 組織細(xì)胞：將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后，用0.25%的 胰酶消化0.5-1個(gè)小時(shí)。經(jīng)過(guò)200-400目篩網(wǎng)過(guò)濾得到單細(xì)胞懸液。 1000 g離心5分鐘，棄上清，沉淀用1 ml預(yù)冷的PBS重懸。再次 1000 g離心5分鐘，棄上清。 注意，最后一次離心，棄上清后留50 μl上清，渦旋混勻。
2、細(xì)胞固定 細(xì)胞沉淀用1 ml -20 ℃預(yù)冷的75%乙醇輕輕混勻，4℃固定2小 時(shí)以上或者過(guò)夜。然后，1000 g離心5分鐘，輕輕棄上清，沉淀用1 ml預(yù)冷的PBS重懸，1000 g離心5分鐘，棄上清。
3、染色 PI染色工作液配置： 0.5 ml染色緩沖液（C液）中加入25μl PI 染液（A液）和10 μl RNase A（B液），混勻待用。每個(gè)細(xì)胞樣品 加入0.5 ml配置好的PI染色工作液，輕輕混勻重懸細(xì)胞。37℃，避 光孵育30分鐘，直接上流式細(xì)胞儀檢測(cè)（5小時(shí)內(nèi)完成為佳）。激 發(fā)波長(zhǎng)為488 nm，檢測(cè)紅色熒光。 注意：每個(gè)檢測(cè)細(xì)胞數(shù)不超過(guò)1×106個(gè)。

1、PI具有毒性，操作時(shí)應(yīng)注意防護(hù)，保護(hù)眼睛、避免吸入、并戴一次性手套。
2、PI存在淬滅現(xiàn)象，保存和使用過(guò)程中注意避光。

-20 ℃避光保存，有效期12個(gè)月。