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                預(yù)染marker的特性概述

                更新時間:2017-07-21      點擊次數(shù):1936
                  預(yù)染marker可提高特異性的識別能力。在做westen blot時,用惰性蛋白質(zhì)或非離子去污劑封閉膜上的未結(jié)合位點可以降低抗體的非特異性結(jié)合。封閉劑應(yīng)該封閉所有未結(jié)合位點而不替換膜上的靶蛋白、不結(jié)合靶蛋白的標委、也不與抗體或檢測試劑有交叉反應(yīng)。zui常見的封閉劑是BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠和Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液。
                 
                  預(yù)染marker還可以在膜上標記蛋白分子量,所以吸引了許多實驗室人員購買預(yù)染蛋白標準。值得注意的是預(yù)染蛋白Marker與染料共價耦聯(lián),所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發(fā)生某些變化,可能導(dǎo)致一些偏差,所以不太適合定位蛋白——不過多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標蛋白*一樣,我們得到的也不過是一種相對Marker指示的參考大小,zui后都需要Western來定性,所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶,預(yù)染Marker還是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白標準一起使用。
                 
                  預(yù)染marker在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了我們的實驗,這種蛋白分子量標準可以幫助我們在電泳時、電泳后,以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率——比如,已知垂直電泳*分辨區(qū)域大約在膠的2/3處,如果使用預(yù)染Marker就可以預(yù)測目標蛋白進入*分辨區(qū)時停止電泳以得到*分辨效果;如果觀察到Marker電泳異常也可以及時終止電泳;另外在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否*。
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