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文獻信息
題目：Regulation of the migration of colorectal cancer stem cells via the TLR4/MyD88 signaling pathway by the novel surface marker CD14 following LPS stimulation
雜志：Oncology Letters 27.2 (2024): 60.
作者：Li Y, Shi J, Liu Z, et al
圖 文獻引用產品信息
研究背景
結直腸癌(CRC)是全球癌癥相關死亡的主要原因之一，主要原因與CRC干細胞(CCSCs)引起的術后癌癥復發、轉移或癌細胞耐藥有關，CCSCs缺乏一致和可靠的標記物限制了它們在臨床實踐中的使用。為了啟動促炎反應，脂多糖(LPS)和CD14（單核細胞、巨噬細胞和中性粒細胞的一種特殊表面標志物）通過Toll樣受體4(TLR4)信號通路相互作用，此外，脂多糖通過TLR4信號通路促進結直腸癌的發展和轉移，CD14與腫瘤的復發、生長、轉移和治療耐藥有關，這與CSC的特征（如復發、生長、轉移和耐藥）是一致的，這表明CD14可能與CCSCs相關。
研究方法
本研究采用免疫熒光雙標記法檢測CD133和CD14，定量評估結直腸癌組織和癌旁組織石蠟包埋切片CCSCs中CD14的表達。隨后，從結直腸癌組織中提取CD14+細胞，通過分析增殖、腫瘤親和性和治療耐藥性來檢測其干性特征，以證實表型鑒定。此外，遷移的體外檢測能夠檢測CD14的功能。
研究結果
1、癌旁組織相比，所有結直腸癌組織中CD14和CD133共表達的陽性率均顯著升高。
圖 CD14在CD133標記的結直腸csc中表達
2、EdU和CCK-8檢測結果顯示結腸癌CD14+細胞表現出更強的增殖能力。
圖 結腸癌CD14+細胞表現出增強的增殖能力
（CCK-8購自愛必信abs50003 CCK-8試劑盒）
3、細胞克隆實驗表明，與CD14-細胞相比，CD14+細胞更大，核分裂增加，聚集成簇。用裸鼠異種移植實驗表明植入45天后，CD14+細胞組的腫瘤明顯大于CD14-細胞組。
圖 CD14+細胞在結腸癌中具有致瘤性
4、耐藥性分析。CD14+組和CD14-組細胞的IC50分別為2.554和17.02mg/L，表明與陰性組相比，陽性組的耐藥性增加。
圖 CCK-8測定5-FU對CD14+和CD14-細胞48h的IC50效應曲線
5、Transwell實驗結果顯示，與對照組相比，內毒素組表現出更強的遷移能力，而內毒素+中和抗體組的遷移能力比對照組更強（圖A）。創面愈合實驗表明，內毒素組的細胞遷移能力明顯高于內毒素+中和抗體組（圖B）。RT-qPCR結果顯示MyD88基因表達水平以內毒素組最高（圖C），Western blotting顯示TLR4和MyD88蛋白的表達在內毒素+中和抗體組和內毒素組均顯著高于對照組，其中內毒素組的增加更明顯（圖D）。
圖 內毒素影響細胞遷移
（RIPA裂解液abs9229、彩色PAGE快速凝膠試劑盒(10%)abs9367、ECL化學發光檢測試劑盒abs920、 TLR4抗體abs132000、MyD88抗體abs135682、LPSabs47014848, 細胞快速RNA提取試劑盒 abs60027）
常規裂解液對比
品名 | RIPA裂解液（弱） | RIPA裂解液（中） | RIPA裂解液（強） |
貨號-規格 | abs9230-100mL | abs9228-100mL | abs9229-100mL |
成分表 | 50mM Tris-HC(pH7.4) | 50mM Tris-HC(pH7.4) | 50mM Tris-HC(pH7.4) |
150mM NaCl | 150mM NaCl | 150mM NaCl | |
1%NP-40 | 1%NP-40 | 1%Triton X-100 | |
0.25% 脫氧膽酸鈉 | 0.5% 脫氧膽酸鈉 | 1% 脫氧膽酸鈉 | |
0.1% SDS | 0.1% SDS | ||
以及正釩酸鈉，氟化鈉，EDTA和抑肽酶等多種抑制劑 | 以及正釩酸鈉，氟化鈉，EDTA和抑肽酶等多種抑制劑 | 以及正釩酸鈉，氟化鈉，EDTA和抑肽酶等多種抑制劑 | |
特點 | 不含高濃度去垢劑 | 有較高濃度的去垢劑，不適合用Bradford法來測定總蛋白濃度 | 有較高濃度的去垢劑，不適合用Bradford法來測定總蛋白濃度 |
裂解強度 | 溫和 | 中 | 強 |
膜蛋白 | 一般 | 較好 | 很好 |
胞漿蛋白 | 很好 | 很好 | 很好 |
核蛋白 | 較好 | 較好 | 很好 |
應用推薦 | WB，IP，Co-IP | WB，IP | WB，IP，Co-IP |
本期好物推薦
類別 | 貨號 | 產品名稱 | 規格 |
樣本處理 | abs9346 | 細胞漿、細胞核及細胞膜蛋白抽提試劑盒 | 50T |
abs9116 | 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100mL | |
abs9162 | 廣譜型磷酸酶抑制劑混合物(100×儲液) | 1mL | |
abs9161 | 廣譜型蛋白酶抑制劑混合物(不含EDTA,100×DMSO儲液) | 1mL | |
蛋白定量 | abs9232 | BCA蛋白定量試劑盒 | 500T |
膠 | 配膠試劑盒、Glass gel預制膠、Plastic gel預制膠、abs93系列預制膠 | ||
上樣與電泳 | abs953 | 上樣緩沖液(2×) | 10mL |
abs9829 | 上樣緩沖液(5×) | 10mL | |
abs951 | 電泳液(10×) | 100mL | |
abs923 | 預染蛋白Marker(10-245kDa) | 500uL | |
轉膜 | abs932 | PVDF膜(0.45μm) | 20張 |
abs960 | NC膜(0.45μm) | 20張 | |
abs950 | 電轉液(10×) | 100mL | |
封閉 | abs9175 | 脫脂奶粉 | 500g |
abs9157 | 牛血清白蛋白 | 100g | |
抗體稀釋與去除 | abs954 | WB專用一抗二抗稀釋液 | 100mL |
abs967 | Western一抗二抗去除液(強堿性) | 500mL | |
顯色與檢測 | abs920 | ECL化學發光檢測試劑盒 | 25mL×2 |
Absin產品線：
爆款產品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(類器官試劑盒+基質膠，胎牛血清+培養添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...
特色產品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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