干貨 | 小分子化合物常見問題解答

Q1：收到化合物后如何處理？

A1：收到化合物后若最近一段時間不使用，建議粉末狀態下-20℃儲存。正式實驗時，可提前一天按照說明書的要求選擇合適的溶劑配制儲存液（不穩定的化合物需現配現用），并于-20℃分裝保存，避免反復凍融造成的藥物使用效果不佳。

Q2：按照產品說明書的要求操作，化合物沒有溶解好應該如何處理？

A2：一般情況下，按照說明書推薦的溶解方式是可以溶解的，個別比較特殊的化合物不溶可以采取以下助溶措施：
1）水浴加熱45℃以下，20-30min；
2）超聲處理，15min左右。

Q3：DMSO含量多少對細胞/動物沒有損傷？

A3：一般情況下，細胞（體外）實驗要求DMSO的終濃度不超過0.1%；動物（體內）實驗中，若是正常鼠，DMSO的終濃度最好不超過10%，若是裸鼠或體弱鼠，DMSO的終濃度建議不超過2%。建議在實驗中設置溶劑對照，排除DMSO對實驗造成的影響。

Q4：化合物摩爾濃度如何計算？

A4：愛必信→技術資源→產品資訊，參考軟文《細胞培養小分子藥物配制方法解析》

愛必信→技術資源→常用工具→摩爾濃度計算器

Q5：動物/細胞實驗化合物如何稀釋？用什么溶劑稀釋？

A5：一般情況下，化合物先溶于某一溶劑（如DMSO）配成儲存液，再用另一種溶劑（如PBS）進行稀釋，不能將2種溶劑混合再去溶解。細胞（體外）實驗可選擇培養基、生物緩沖液等進行稀釋；動物（體內）實驗溶解方式以下方案僅供參考（現配現用，當天使用）：

1）依序添加每種溶劑: 10% DMSO→90%（20% SBE-β-CD in saline）

2）依序添加每種溶劑:10% DMSO→ 90% Corn Oil（建議實驗周期半個月以內）

3）依序添加每種溶劑: 10% DMSO →40% PEG300→5% Tween 80 →45% saline

備注：以1mL工作液為例，取100μL澄清DMSO溶解的儲存液加到400μL PEG300中，混合均勻；再向上述體系中加入50μL Tween-80，混合均勻；然后再繼續加入450μL生理鹽水定容至1mL。

生理鹽水的配制：將 0.9g氯化鈉，溶解于ddH?O并定容至100mL，可以得到澄清透明的生理鹽水溶液。

Q6：化合物保存條件是什么，能保存多久？

A6：一般情況下，粉末在-20℃儲存一年有效；溶解后分裝保存，避免反復凍融，-20℃儲存6個月有效，2-4℃保存兩周有效。對于不穩定的化合物，需現配現用。

Q7：說明書沒有提到我購買的化合物是否無菌，需要做滅菌處理嗎？如何滅菌？

A7：愛必信小分子化合物都沒有做無菌處理，使用時需要除菌。若儲存液用DMSO溶解，因DMSO具有很強的殺菌能力，可認為配制好的溶液即為無菌溶液。對于用其它溶劑（如水）溶解的化合物可用0.22μm濾膜進行過濾除菌。避免使用紫外滅菌和高壓蒸汽滅菌，可能會破壞化合物的結構，影響其生物活性。

Q8：為什么參考文獻或之前的實驗濃度，對我的細胞沒有效果了？是化合物有問題嗎?

A8：小分子藥物的使用濃度受細胞種類，傳代次數、細胞通透性，孵育時間等多種因素的影響。不同實驗作用效果不同、文獻只能作參考，不能作為標準。除參考文獻外，還需要做濃度梯度曲線確定最佳作用濃度。若之前用過這個化合物，已經摸索最佳濃度，可以排查是不是由于化合物批次不同或保存不當超過有效期引起的差異。

Q9：配制的澄清儲存液，使用時從冰箱取出發現有沉淀，這個該怎么處理？

A9：如果儲存液的濃度接近化合物溶解度，凍融會產生沉淀。這種沉淀是暫時的，當溶液的溫度恢復到室溫時會溶解。如果沉淀溶解緩慢，可以適當水浴加熱或超聲處理。

Q10：是否可以使用小分子化合物作為分析標準品或者對照品？

A10：貨號以abs8開頭的小分子化合物適用于細胞/動物實驗，不用作分析標準品或者對照品。標注有標準品和貨號以abs4開頭的植物提取物，可作為標準品使用。

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