如何解決生物制品中的核酸殘留的痛點問題？

生物制品是指以微生物、細胞、動物或人源組織和體液等為起始原材料，用生物學技術制備，用于預防、治療和診斷人類疾病的制劑。當前，隨著越來越多的生物制品進入治療領域，于是生物制品與之俱來的生物安全性問題被漸漸提上日程，生物制品的質量控制也日趨嚴格。其中宿主細胞殘留核酸由于可能會傳遞腫瘤或病毒相關基因，存在潛在致癌性和感染性風險。各國藥品監督管理機構對生物制品中宿主細胞殘留核酸的態度謹慎且明確，要求各制藥企業建立詳細可行、靈敏度高的檢測方法，用于驗證藥品的純化過程可以去除殘留DNA，并對終產品的放行嚴格把關，避免攜帶外源DNA的藥品流入市場。

宿主細胞殘留DNA標準

各國藥品監督管理機構均對生物制品中宿主細胞DNA的殘留量進行了嚴格的限度控制以規避風險。

表1 宿主細胞殘留DNA標準

除了對宿主核酸殘留量有限度規定，我國對于DNA殘留片段的大小也有了明文規定：2022年，我國國家藥品監督管理局藥品審評中心發布的《體內基因治療產品藥學研究與評價技術指導原則（試行）》中提到對于生產若使用了腫瘤細胞系致瘤細胞系或攜帶有致瘤基因、病毒來源序列的細胞（如HEK 293T細胞），在確保無完整活細胞殘留的同時，需對DNA的殘留量和殘留片段大小進行控制。建議盡量將殘留DNA控制在10ng/劑以內，DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。

表2 宿主細胞殘留DNA片段風險因子

注：片段越長，風險因子越大。

宿主細胞殘留DNA檢測方法

為確保生物制品的安全性和質量，因此建立合適的宿主細胞殘留DNA檢測方法至關重要。《中國藥典2020年版》通則3407中推薦了三種外源性DNA殘留量測定方法，包括DNA探針雜交法、熒光染色法和定量PCR法。

表3 宿主細胞殘留DNA檢測方法

其中定量PCR法因其檢測特異性高、靈敏度高、重現性好、通量高、耗時短等優點現已成為生物制品工藝研究和產品質量控制的檢測方法。愛必信最終選擇更準確、可靠、科學的熒光探針（TaqMan®）qPCR法作為細胞殘留DNA檢測的方法。推出了一系列宿主細胞殘留核酸定量檢測試劑盒，能夠專一快速的對中控樣品或原液成品中宿主細胞殘留核酸進行準確定量，靈敏、準確和定量下限，能滿足病毒疫苗生產、重組蛋白藥物純化、細胞治療和疫苗研究中緩解PBMC細胞結團以及慢病毒的大規模純化等工業客戶的工藝研究和質控需求。

圖 熒光探針（TaqMan®）qPCR法

宿主細胞殘留DNA檢測流程

宿主細胞殘留DNA檢測流程主要包含宿主細胞殘留DNA提取（磁珠法）和宿主細胞殘留DNA定量檢測（熒光探針（TaqMan®）qPCR法）。

圖 宿主細胞殘留DNA檢測流程

宿主細胞殘留核酸提取

宿主細胞殘留DNA（磁珠法）樣本前處理試劑盒（abs60544）用于生物制品樣本前處理，精準抽提各種生物制品中宿主細胞殘留DNA。搭配宿主殘留DNA/DNA片段檢測試劑盒使用。

產品優勢：

1）靈敏度高：靈敏度可達0.03pg/uL，回收率可達70-130%，符合國家藥典標準；
2）通用性強：可手動提取、可配合全自動核酸提取儀自動化提取，滿足高通量；
3）適用性強：適用于E.coli、HEK293、Vero、CHO等多種宿主DNA樣本；
4）操作便捷：消化時間僅15min，配合核酸提取儀1h內完成整個提取過程。

產品信息：

宿主細胞殘留核酸/DNA片段檢測

產品優勢：

1）快速便捷：方便操作，1h出結果；
2）穩定性高：受環境影響較小，保質期內性能穩定；
3）精密度高：各濃度檢測值CV<15%；
4）專一性強：考察生物制品生產中常用的DNA對檢測試劑盒的干擾，干擾組應與對照組重合，未見干擾。

產品信息：

[1] State Administration for Market Regulation. Administrative measures for the batch release of biological products[S].2020-12-11

[2]《體內基因治療產品藥學研究與評價技術指導原則（試行）》，國家藥品監督管理局藥品審評中心，2022年5月

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