螢光素酶報告基因檢測so easy！

前幾期小愛依次給大家介紹了螢光素酶報告基因相關(guān)知識，想必大家對于螢光素酶報告基因檢測技術(shù)有了一定了解。話不多說，本期給大家安利另一款單螢光素酶報告基因檢測試劑盒——愛必信海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60343）。

一、產(chǎn)品簡介

真核基因表達調(diào)控研究常用的方法是進行報告基因的檢測，生物發(fā)光法又是報告基因檢測常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉(zhuǎn)化，并發(fā)射出光子。海腎螢光素酶跟螢火蟲螢光素酶類似，也是一胞內(nèi)蛋白，但是它從海腎中分離得到，大小為36kDa，

發(fā)光作用原理也比較簡單：海腎螢光素酶只需要氧氣就可以催化腔腸素（反應(yīng)底物），氧化生成高能產(chǎn)物coelenteramide，并發(fā)出藍光，MAX發(fā)光波長為480nm。其作用反應(yīng)式為如圖1，海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60343）可為在哺乳動物細(xì)胞中的表達提供快速、靈敏、穩(wěn)定的檢測方法。

圖1 海腎螢光素酶反應(yīng)化學(xué)式

二、產(chǎn)品信息

三、產(chǎn)品特點

1、快速：細(xì)胞裂解在10-15min內(nèi)完成；
2、方便：試劑易于配制，樣品檢測步驟簡單。

四、實驗流程

圖2 海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒操作流程

五、具體應(yīng)用

海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒的適用于單報告基因檢測，與螢火蟲螢光素酶報告基因適用場景類似。具體的應(yīng)用場景包括而不局限于以下內(nèi)容：

圖3 海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒的應(yīng)用舉例

六、實驗數(shù)據(jù)

使用海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒與市面上同類產(chǎn)品進行對比實驗，檢測光信號RLU值，本公司產(chǎn)品檢測結(jié)果高于同類競品。

七、Q&A

1、檢測的螢光數(shù)值很低怎么辦？

1）可能為轉(zhuǎn)染效率低

a.優(yōu)化轉(zhuǎn)染實驗條件，用較易轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒做陽性對照（如轉(zhuǎn)染過表達螢光蛋白質(zhì)粒）；
b.確保轉(zhuǎn)染DNA的質(zhì)量，可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對DNA質(zhì)量進行鑒定；
c.選擇活性較高，處于指數(shù)分裂期的細(xì)胞進行轉(zhuǎn)染。

2）可能為啟動子活性低或誘導(dǎo)失敗
a.轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)使用特異性誘導(dǎo)啟動子的條件；
b.優(yōu)化細(xì)胞的培養(yǎng)條件，提高螢光素酶的表達量；
c.更換強啟動子（如SV40、CMV）。

3）樣品裂解效率低
a.細(xì)胞培養(yǎng)時間不宜過長，12-36h內(nèi)最好，長時間培養(yǎng)后，細(xì)胞可能會難裂解。
b.加入的裂解液需足量，保證細(xì)胞能夠充分裂解。

4）檢測過程操作不規(guī)范
a.選擇合適的檢測儀器，能夠檢測化學(xué)發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都適用于該實驗；
b.需加入足量底物，保證底物的飽和，否則會造成檢測結(jié)果出現(xiàn)很大偏差；
c.室溫反應(yīng)。反應(yīng)時各個組分（細(xì)胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫；
d.螢光素酶的半衰期一般約30min，加完底物后可立即檢測，盡量在30min內(nèi)完成。

5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，螢火蟲螢光素酶底物-20℃保存；海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存；
b.反應(yīng)工作液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。

2、進行檢測的過程中，螢光信號值太高該如何進行調(diào)整？

1）減少質(zhì)粒轉(zhuǎn)染量；
2）細(xì)胞樣品裂解后，離心取上清后檢測或?qū)α呀猱a(chǎn)物進行稀釋后檢測。

注：不建議通過減少底物量來降低螢光值，需要保證底物的飽和來反映螢光素酶真實的表達水平，否則會造成檢測結(jié)果出現(xiàn)大的偏差。

八、注意事項

1、使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進行后續(xù)實驗。
2、由于溫度對酶反應(yīng)有影響，所以測定時，樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。
3、海腎螢光素酶催化的生物發(fā)光的MAX波長為480 nm，為防止孔間干擾，建議使用白色不透光孔板。

九、其他相關(guān)產(chǎn)品推薦：

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Absin特色產(chǎn)品線：

WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...