新品上線——Organotial奶牛乳腺類器官培養基試劑盒

奶牛的乳腺分支形態發育是完成泌乳功能的基本條件。乳腺分支結構可以通過提高乳腺腺泡組織的數量和分泌功能來提高奶牛乳產量。3D培養可以在體外誘導組織器官分支形態的發生，已經是研究乳腺分支形態普遍使用的方法。

類器官(Organoids)是器官特異性細胞類型的3D細胞集合，這些細胞從干細胞或器官祖細胞發育而來，并能以與體內相似的方式經細胞分序(cell sorting out) 和空間限制性的系別分化而實現自我組建。

圖1 奶牛乳腺類器官明場圖展示

一、產品信息

二、組分信息

三、培養方法

1、原代培養

1）取材后的奶牛乳腺組織須在 2-8℃含有組織保存液 E的取樣瓶中，快速轉運至潔凈實驗室進行組織處理和干細胞分離，拍照并登記信息。
2）準備若干培養皿，加入 4℃預冷的奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B備用。
3）取樣瓶消毒，將組織放入培養皿中，利用奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B清洗三次后，利用眼科剪或手術刀將腫瘤組織剪切成體積約為1-3mm3的組織塊。
4）組織用奶牛乳腺原代組織消化液 C消化，37℃震蕩消化10-20min，（消化過程中隨時觀察消化情況）。
5）取少量液體在顯微鏡下觀察，鏡下觀察到較多的單個細胞或 70um 以下的細胞簇后，加入三倍體積奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B終止消化。
6）使用100um孔徑的篩網進行過濾，將濾液收集后，于300g富集離心5min后移去上清，添加奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B重新重懸離心。
7）基質膠計算：第6步后觀察收集到的組織體積，添加25倍組織體積的基質膠重懸鋪板。
8）24孔細胞培養板為例，每孔點膠25ul組織基質膠混合物進行鋪板（4℃下操作）。
9）將鋪好的培養板放入37℃培養箱中10-15min成膠，添加奶牛乳腺類器官培養基 A（恢復室溫）進行培養。

2、 類器官傳代培養

1）移液器吸去培養基，每孔添加1-2ml 4℃類器官緩沖液 B放置2min；
2）移液搶輕柔吹打基質膠，收集在15ml離心管中，4℃靜置10min（每6-8孔為一組）；
3）a. 類器官數量不足或體積較小時： 離心5min棄去上清，添加適量奶牛乳腺類器官緩沖液 B重懸移入1.5ml離心管，300g離心5min棄去液體進行第4步；
b. 類器官數量較多或體積較大時：離心5min棄去上清，添加適量類器官傳代消化液 D消化2-3min，添加奶牛乳腺類器官緩沖液 B終止消化，離心5min棄去混合液，添加適量奶牛乳腺類器官緩沖液 B重懸移入1.5ml離心管，300g離心5min棄去液體進行第4步；
4）類器官收集后，添加基質膠重懸，每孔25ul基質膠鋪在24孔細胞培養板中，放置培養箱中10-15min添加500ul奶牛乳腺類器官培養基A。

3、類器官凍存

1）移液器吸去培養基，每孔添加1-2ml 4℃類器官緩沖液 B放置2min；
2）移液搶輕柔吹打基質膠，收集在15ml離心管中，4℃靜置10min（每6-8孔為一組）；
3）離心5min棄去上清，添加適量奶牛乳腺類器官緩沖液 B再次重懸，300g離心5min棄去液體；
4）添加適量類器官凍存液 F，輕柔吹打重懸，以24孔細胞培養板為例：密度為2個孔凍存1管，每管體積1.4ml；
5）做好標記信息，進行程序降溫后，移入液氮長期保存。

4、 類器官復蘇

1）取10ml奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B于15ml離心管中；
2）從液氮罐中取出凍存的類器官細胞，快速置于 37℃水浴鍋中融解；
3）水浴融解過程中，需輕輕搖動冷凍管，以確保凍存液在 1-2min內充分融解；
4）將溶解后的類器官細胞快速轉移至15ml 離心管，使用移液管輕輕吹打6-8次，300g 離心 5min，然后除去上清液并收集類器官細胞沉淀。添加適量奶牛乳腺類器官緩沖液 B重懸移入1.5ml離心管300g離心5min；
5）基質膠重懸，每孔25ul基質膠鋪在24孔細胞培養板中，放置培養箱中10-15min成膠，添加500ul奶牛乳腺類器官培養基 A。

圖2 奶牛類器官試劑盒組分展示

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