RAW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)攻略
更新時(shí)間：2023-01-10 點(diǎn)擊次數(shù)：1201
RAW 264.7細(xì)胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；在正常培養(yǎng)中，細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)多邊形和不規(guī)則形狀，并伴有許多偽足的生成，細(xì)胞貼壁能力很強(qiáng)。 RAW 264.7細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象。呈不規(guī)則形，貼壁；細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，2-3天即可傳一代；營(yíng)養(yǎng)體系是DMEM+10%FBS。
表1 RAW 264.7細(xì)胞基本信息
名稱 | RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞） |
形態(tài) | 不規(guī)則形 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁；細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，2-3天即可傳一代 |
營(yíng)養(yǎng)體系 | DMEM（abs9483）+10%FBS(abs972)+1%PS（abs9244） |
圖1 RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
首先我們討論的第一大問題是胰酶消化對(duì)RAW 264.7細(xì)胞的刺激分化。如圖2所示：被胰酶消化過(guò)的RAW 264.7細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的分化現(xiàn)象呈多角形，有較長(zhǎng)觸角。
圖2 分化的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
如何避免細(xì)胞傳代因胰酶而受刺激分化，刮取是比較合適的方法。把細(xì)胞培養(yǎng)液倒掉，加入37℃遇溫的PBS，然后刮細(xì)胞，食指和拇指夾緊細(xì)胞刮，細(xì)胞刮橡膠頭刮面切面與平皿平行，用腕力輕輕刮（注意用腕力刮，不要用臂力），切記只能刮一次，不要來(lái)回刮和反復(fù)刮，吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打。
接下來(lái)我們討論的第二種情況是為啥RAW 264.7換了血清批次后聚團(tuán)嚴(yán)重？如圖3所示：換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的RAW 264.7細(xì)胞，呈片狀分部，片層之間間隔明顯。
圖3 更換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
如果您剛好也碰到這種情況，那不妨來(lái)了解一下血清批間差：血清來(lái)源于動(dòng)物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏哪挲g、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件而異。每個(gè)批號(hào)的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。RAW 264.7細(xì)胞本身有聚團(tuán)生長(zhǎng)特性，但嚴(yán)重聚團(tuán)可能受到血清里的某些因子刺激。
怎樣預(yù)防血清批間差導(dǎo)致的細(xì)胞聚團(tuán)呢？先用血清試用裝，試用效果好，可購(gòu)買和血清試用裝批次相同的正裝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對(duì)細(xì)胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達(dá)5年）。
最后咱們討論的第三大問題是有分化的細(xì)胞說(shuō)明細(xì)胞狀態(tài)不好嗎？如圖4所示，細(xì)胞群中有個(gè)別細(xì)胞出現(xiàn)觸角。
圖4 個(gè)別分化的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
值得一提的是培養(yǎng)時(shí)，無(wú)法保證100% 不分化，通過(guò)傳代可以將分化比例控制在一定范圍。RAW264.7細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，2-3天即可傳一代， 傳代時(shí)間間隔超過(guò)3天更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好。推薦傳代比例為1：3—1：6；推薦傳代時(shí)間：2—3天；推薦傳代融合率：80%-90%
看了這么多長(zhǎng)觸角的細(xì)胞，我們來(lái)看看“馬相"還不錯(cuò)的RAW 264.7細(xì)胞吧。如圖5和圖6所示，生長(zhǎng)良好的RAW 即使融合度達(dá)到很高仍不分化，胞體邊界感清晰，各個(gè)喂得圓鼓鼓、胖嘟嘟的，時(shí)刻準(zhǔn)備著為人類生命科學(xué)研究而“獻(xiàn)身"。
圖5和圖6 長(zhǎng)勢(shì)良好的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
本期講解就到這里了，下一期您想了解哪種細(xì)胞的培養(yǎng)攻略呢？歡迎留言評(píng)論哦。如有細(xì)胞培養(yǎng)問題，歡迎掃碼加我微信哦。
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本期小愛推薦
?培養(yǎng)簡(jiǎn)單 ?擴(kuò)增效率高 ?維持穩(wěn)定傳代
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 |
abs977 | 胎牛血清(特級(jí)) | 500ml |
abs972 | 胎牛血清(優(yōu)級(jí)) | 500ml |
abs974 | 胎牛血清(標(biāo)準(zhǔn)級(jí)) | 500ml |
abs9483 | 高糖DMEM培養(yǎng)基 | 500ml |
abs9484 | RPMI-1640培養(yǎng)基 | 500ml |
abs9505 | MEM培養(yǎng)基 | 500ml |
abs9506 | α-MEM培養(yǎng)基 | 500ml |
abs9554 | Ham's F-12 | 500ml |
abs9561 | DMEM/F-12培養(yǎng)基 | 500ml |
abs961 | 10×PBS緩沖液 | 500ml/500ml×10 |
abs962 | PBS緩沖液 | 500ml |
abs970 | D-PBS緩沖液（1×，無(wú)鈣鎂） | 500ml |
abs971 | D-PBS緩沖液(含 Ca2+ Mg2+) | 500ml |
abs9257 | Hanks平衡鹽溶液(不含Ca2+ Mg2+,無(wú)酚紅) | 500ml |
abs9258 | Hanks平衡鹽溶液(含Ca2+ Mg2+,無(wú)酚紅) | 500ml |
abs47014938 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ，含酚紅 | 100ml |
abs47047375 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)，不含酚紅 | 100mL |
abs9479 | 無(wú)DMSO無(wú)血清細(xì)胞凍存液 | 100mL |
abs9417 | 無(wú)血清細(xì)胞凍存液 | 100mL |
abs9473 | 細(xì)胞凍存液(含血清) | 100mL |
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