怎么處理細胞培養(yǎng)板里面的細胞總是聚集在周邊的問題

　　細胞培養(yǎng)板根據(jù)底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V 細胞培養(yǎng)板型)

　　平底的什么類型的細胞都可用﹐但當細胞數(shù)目較少﹐如做克隆時﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等實驗時﹐無論貼壁 和懸浮細胞﹐一般均用平底板。至于U或V型板﹐一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學方面﹐當做兩種不同淋巴細胞溷合培養(yǎng)時﹐需要二者相互接觸以刺激﹐ 因此﹐一般需要U型板﹐因細胞會由于重力的作用而聚集在一個很小的范圍內(nèi)。

　　圓底培養(yǎng)板主要用于同位素摻入的實驗，需要用細胞收集儀收集細胞的培養(yǎng)。

　　細胞接種培養(yǎng)板，細胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊？

　　先看下自己的細胞是如何混勻的？是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板？如果是后者，而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導(dǎo)致細胞中間少，四周多！

　　這里提供一個好辦法：在培養(yǎng)種板之前，把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里進行幾個小時的飽和后再取出，種入細胞時力量要輕，可采取用滴頭在培養(yǎng)板孔的側(cè)面慢慢加入讓細胞懸液流入板孔中，培養(yǎng)的細胞基本是均勻生長。記住千萬不要用振蕩器振蕩，否則你的細胞就會想你說得那樣聚積在一起。

　　培養(yǎng)板孔直徑愈小，這個現(xiàn)象越明顯，24、96孔板這種現(xiàn)象不可避免，因為液體的附壁使得孔內(nèi)培養(yǎng)液不是成一個液平面，而是周邊高，就像凹鏡一樣，而使用這兩種孔板由于需要加干預(yù)等原因而不能加足量培養(yǎng)液，使得細胞隨培養(yǎng)液一起出現(xiàn)“邊集”現(xiàn)象，如果為了使孔中央也有均勻細胞而增加接種細胞數(shù)量的話，這要看你需要觀察何種指標，如果是MTT ，免疫組化的話會因為細胞成層而影響結(jié)果。

　　消化細胞時要注意吹打均勻，避免細胞成團，而且孔內(nèi)培養(yǎng)液量要足夠，一般接種時加足量培養(yǎng)液，加干預(yù)時換一次液，干預(yù)液加培養(yǎng)液量等于接種時培養(yǎng)液量，這樣的話“邊集”現(xiàn)象會有所改觀，不妨一試。