牛垂體提取物是由牛腦垂體制備的提取物，有研究表明BPE具有明顯改善人垂體腺瘤細胞體外無血清培養(yǎng)條件的作用，對離體培養(yǎng)的垂體腺瘤細胞增殖具有促進作用。常用作無血清細胞培養(yǎng)的生長補充劑，可促進上皮細胞、內(nèi)皮細胞和黑色素細胞增殖，廣泛用作各種上皮細胞和黑色素細胞培養(yǎng)中的補充劑。此外，其具有抗氧化能力，可對抗過氧化氫誘導(dǎo)的細胞壞死，蛋白質(zhì)氧化，膜破碎和DNA損傷。BPE是無血清的促有絲分裂添加劑，含有天然生長因子的*混合物，可與MCDB系列（MCDB170或MSDB154）或DMEM / Ham's F12的基礎(chǔ)培養(yǎng)基組合使用。能刺激人支氣管h皮細胞的生 氫化可的松對支氣管卜皮細胞及肺癌細胞的 長。’“但牛垂體提取物對腫瘤細胞生長的作生長均有刺激作用。Invitrogen,DMEM/F12培養(yǎng)基為Gibico產(chǎn)品,L-谷氨酰胺、胎牛血清和丙酮酸鈉為國產(chǎn),一抗為小鼠抗人角蛋白8/18型單克隆抗體，配制，即在DMEM/F12中加入終濃度分別為10μg/mL INS、0·1μg/mL HC。mmol/L谷氨酰胺、100 IU/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素、50 IU/mL兩性霉素B及10 IU/mL慶大霉素,為無血清培養(yǎng)液。*培養(yǎng)基配制。基礎(chǔ)培養(yǎng)基中按需加入10μg/mL TF、20 ng/mL T3、25 ng/mL EGF、牛垂體提取物及5%~10%血清。1·1·4主要儀器400目鐵網(wǎng)濾篩、25 cm2塑料培養(yǎng)瓶(Costar),24孔細胞培養(yǎng)板,6孔細胞培養(yǎng)板,94 mm細胞培養(yǎng)皿,普通離心機,超凈工作臺,血球計數(shù)板,混合纖維脂微孔濾膜(0·22、0·45μm),濾器,針頭式濾器。對于單層中上皮細胞的生長，推薦濃度為35?70ug / ml BPE。通過使用優(yōu)化的基礎(chǔ)培養(yǎng)基如MCDB170或MCDB154，濃度可以降低。確定BPE濃度的有效方法是在選擇的細胞上進行簡單的生長測定。建議將產(chǎn)品分裝成單次使用體積，以避免反復(fù)凍融所引起的可能活性損失。
牛垂體提取物存在時才表現(xiàn)出強的促MC生長作用，提示其他未確定的腦衍生促分裂劑在MC的生長中起到怍用‘“。神經(jīng)生長因子(NGF) NGF是一仲對神經(jīng)系統(tǒng)有營養(yǎng)及分比怍用的多肽，它具有促進中樞及周圍神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育生長、促進傷口愈合及影響肥大細胞、B淋巴細胞等多種功能’“。作為起源于胚胎神經(jīng)嵴的MC是否也受到NGF的影響以及表皮內(nèi)角朊細胞能否分泌NGF一直是人們關(guān)注的問題。Peaeocke等醴j分別用免疫熒光法、免疫印跡及DNA印跡技術(shù)證實了當培養(yǎng)基內(nèi)含有50ng/mI濃度的。TPA時，MC表達NGF受體，培養(yǎng)基中除去垂體提取物或血清后，受體量減少約1/2,uV照射后MC也表達NGF受體。在用不同劑量的NGF培養(yǎng)MC后,發(fā)現(xiàn)其細胞數(shù)量無差異,提示NGF可能僅對MC的存活起到一定作用。Yaar’等0。’的進一步研究表明，在MC培養(yǎng)基中加入NGF‘后其表達NGF的mRNA含量明顯增加并觀察到NGF可促進MC的移動及分支形成，同時用Nor’thern印跡技術(shù)證實表皮角朊細胞可表達NGF的mRNA，該發(fā)現(xiàn)為表皮內(nèi)NGF可來自角朊細胞提供了證據(jù)。
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