牛垂體提取物的技術(shù)原理及使用方法

 

  牛垂體提取物高有絲分裂活性，一致的高活性生長(zhǎng)因子和激素來(lái)源新西蘭品種，采購(gòu)文檔支持，立即可用，無(wú)菌液體。角朊細(xì)胞的分離，采用中性蛋白酶及胰蛋白酶聯(lián)合消化，分離角朊細(xì)胞。具體步驟如下，取包皮環(huán) 切術(shù)切除的成人包皮，切成約015c m ×015c m 皮塊，用含青霉素 (10萬(wàn) U L ) 、 鏈霉素 (100m g L ) 的 D -H ank s 液洗 3次，加入中性蛋白酶 (D isp ase :200U m l ) , 在 4℃下，消化 18~20h分離真。表皮，表皮部分再用 0及 011%的 ED 5后 , D S 培養(yǎng)基 200, 1500r m in 5in , , 加入 PB S 液，重 復(fù)洗細(xì)胞 3次 , 計(jì)數(shù)細(xì)胞。角朊細(xì)胞的培養(yǎng)，將體外分離的細(xì)胞 分成兩部分，分別懸浮在含牛腦垂體提出物和不含牛腦垂體提出物的MB培養(yǎng)基中，以相同的細(xì)胞接。

 

  牛垂體提取物種密度 (50000 c m 2，在相同條件 (37℃ , 5%CO 2) 下 , 進(jìn)行無(wú)血清培養(yǎng)。結(jié)果與討論，繼Green等，以3T3細(xì)胞為滋養(yǎng)層成功地培養(yǎng)了人角朊細(xì)胞之后，Boyce 等，采用無(wú)滋養(yǎng)層，無(wú)血清培養(yǎng)技術(shù)，在體外成功地培養(yǎng)了人表皮角朊細(xì)胞，并由此而開(kāi)發(fā)出角朊細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng) 基MCDB153。此培養(yǎng)基中鈣離子濃度較低 (0106mm o l L ) 角朊細(xì)胞在此培養(yǎng)基中呈現(xiàn)出基底細(xì)胞形狀，以單層方式向外生長(zhǎng)，不能成層，細(xì)胞之間缺 乏橋粒連接，不能形成表皮片。將體外分離的角朊細(xì) 胞接種在塑料培養(yǎng)皿上，在MB培養(yǎng)液中培養(yǎng)，4h 后，角朊細(xì)胞開(kāi)始貼壁 , 24h 后 , 大部分貼壁，72h 后 , 可見(jiàn)到角朊細(xì)胞能以單個(gè)細(xì)胞為克隆 , 以單層形 式生長(zhǎng)。10d 左右長(zhǎng)滿(mǎn)單層 ，可傳代。與原代培養(yǎng)的 角朊細(xì)胞相比 , 傳代后的角朊細(xì)胞更易貼壁和增殖。培養(yǎng)7d長(zhǎng)滿(mǎn)單層，可再行傳代。