抗體相關問題FAQ

1.如何保存和分裝抗體？

      對于許多抗體而言，分裝為小等份在 -20℃ 或 -80℃下凍存是*的保存條件。抗體保存應避免反復凍融，分裝可以zui大限度減少凍融對抗體造成的損壞，還可避免多次從同一管中移取抗體而引入污染。但是每份不應該少于10 uL。分裝的體積越小，抗體的濃度受蒸發和管壁吸附的影響就會越大。大部分情況下，抗體在 4 ℃條件下能夠保存1-2周。但有部分特例。為了防止微生物污染，可在抗體中加入適當濃度的NaN₃。如果要用抗體對活細胞進行染色或處理，或者要用抗體進行體內研究，則不能使用含NaN₃的抗體制備物；這種抗菌劑對大部分生物體都有毒害作用。部分加甘油的抗體，直接儲存在-20℃即可。

2.如何正確選擇一抗？

      根據檢測的種屬和實驗方法尋找相關一抗產品，樣品的性質決定哪個抗體zui合適。需考慮以下方面：

      (1) 檢測的蛋白質區域。有些抗體僅能識別已還原和變性的蛋白質，因為這樣露出了蛋白折疊形成的二級和三級結構中隱藏起來的表位。而有些抗體僅能識別天然、折疊狀態的蛋白質上的表位。免疫組化中，有些抗體僅適用于未固定的冷凍組織，如果沒有抗原修復步驟逆轉福爾馬林固定所引起的交聯，那么其它抗體不能與福爾馬林固定、石蠟包埋的組織中的靶標結合。

      (2) 樣品處理方式；有些抗體要求樣品用特定方式處理。

      (3) 產生一抗的生物體應與樣品生物體不同；這是為了避免抗免疫球蛋白的二抗與樣品中的內源性免疫球蛋白間發生交叉反應。

3.如何正確選擇二抗？

      二抗是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體，在免疫學反應中，經常需要針對試驗選擇不同的二抗。考慮以下方面：

      (1) 針對一抗來源的二抗；比如一抗是小鼠來源的，二抗就要是抗小鼠的。

      (2) 二抗需與一抗的類別或亞類相匹配；比如一抗是IgM，二抗就要是抗IgM的抗體。

      (3) 為了增加特異性、降低背景：可以選擇Fab段的抗體（去除Fc段的）、經過標本來源種屬血清吸附的的二抗。

      (4) 查看二抗的說明書，選擇經過驗證可以用于相應實驗方法的二抗。

      (5) 可以通過一抗說明書頁面的“Related Products”來選擇合適的二抗。

4.二抗耦聯標記

      標記物與抗體偶聯，以顯示目標蛋白的存在。標記物的選擇取決于實驗應用。主要有：

         (1) 熒光標記；熒光標記物在特定波長的光激發下發出可見范圍內的光。有多種熒光標記物可供選擇，它們具有*的激發和發射特性。

         (2) 酶標記；酶標記物如辣根過氧化物酶 (HRP) 和堿性磷酸酶 (AP) 在與適當的底物混合時形成有色沉淀。

         (3) 生物素標記；生物素化的抗體可用于放大信號，具體通過親和素-生物素-酶或熒光染料復合物或者親和素或鏈霉親和素偶聯到酶或熒光染料實現。

5. 如何確定抗體的稀釋比例?

      如果說明書中有推薦的稀釋比例，請按照該稀釋比例進行實驗。但是由于標本類型、實驗條件、操作環境等各種因素的影響，推薦濃度僅作為參考。實驗者需要在推薦濃度周圍進行多個濃度梯度的實驗，從中發現*的稀釋比例。如果說明書沒有推薦稀釋比例，僅注明“Use at an assay dependent dilution”，就需要做大量的預實驗來摸索*的稀釋比例。